猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制

来源：中国生物工程杂志2015年第3期北京时间：

作者：王鹏, 郑兆鑫, 刘明秋

单位：复旦大学生命科学学院 上海工业菌株工程技术研究中心 上海 200433

摘要：目的: 研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒 (PRV)具有抑制作用.方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪 Mx1和牛Mx1 基因,并克隆到pcDNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法将其分别导入到PK-15细胞,从mRNA水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况,然后用细胞毒性试剂盒检测这两种蛋白是否对PK-15细胞具有毒性.之后,通过荧光定量PCR检测猪 Mx1和牛Mx1 在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对PRV的抑制情况,并观察100TCID50病毒攻击细胞72h后的病变程度.结果: 成功克隆了猪 Mx1和牛Mx1 基因,经mRNA水平和蛋白质水平证实,两种重组质粒在PK-15细胞内能够正常表达.从荧光定量PCR和细胞病变的角度来看,细胞内表达的Mx1蛋白对PRV具有显著性的抑制(P <0.001).结论: 猪 Mx1和牛Mx1 基因在PK-15细胞中表达的Mx1 蛋白能够抑制PRV在胞内的复制.

关键词：猪Mx1,牛Mx1,PK-15细胞,伪狂犬病病毒

基金资助：国家科技重大专项(2013ZX08007-004),教育部留学回国人员科研启动基金,上海市科学技术委员会项目(13DZ2252000)资助项目