重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的中试发酵及纯化工艺

来源：中国生物工程杂志2015年第2期北京时间：

作者：刘亚龙, 闫东明, 翁樑, 邹雪, 刘丹, 彭超, 苏亚南, 闫锦锦, 张静, 郭志燕

单位：芜湖康卫生物科技有限公司 芜湖 241000

摘要：重组基因工程菌经中试发酵后,诱导表达出以包涵体形式存在的重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)蛋白。采用Q Sepharose High Perfomance 阴离子交换层析,将洗涤、裂解后得到的可溶性蛋白进行纯化,得到纯度高达98%的重组LTB蛋白。利用Sephadex G-25分子筛层析法将重组LTB蛋白中的盐和尿素脱去,使蛋白复性,最终获得目的蛋白纯度为95%。将得到的重组LTB蛋白进行免疫双扩散实验,结果表明此蛋白具有良好的生物学活性。通过高效表达重组LTB蛋白的大肠杆菌发酵,确定了其中试发酵工艺,并建立了Q柱一步纯化即可获得目的蛋白的方法,该工艺简捷、高效、易于工业化生产,为重组LTB蛋白的生产和应用奠定了基础。

关键词：LTB,包涵体,纯化

基金资助：国家科技重大专项子课题(2014ZX09102042-002)、安徽省科技攻关计划(1301041020)资助项目