头孢菌素C酰化酶突变位点的研究

来源：中国生物工程杂志2015年第2期北京时间：

作者：徐雪丽, 张伟, 刘艳, 谢丽萍, 胡又佳

单位：1. 中国医药工业研究总院张江分院 上海 201203;2. 上海医药工业研究院 上海 200437

摘要：头孢菌素C酰化酶能直接将头孢菌素C(CPC)转化为7-氨基头孢烷酸(7-ACA),此一步酶法具有很大的经济价值,所以得到很多研究者的关注,特别是提高CPC酰化酶活性及专一性的研究。以CPC酰化酶基因 ecs50 为基础,利用重叠延伸PCR,对文献报道的活性提高的突变体酶S12的6个位点分别进行突变,将得到的6个突变体V122A、G140S、F297N、I314T、I415V、S710L进行诱导纯化后,检测酶活,以此来研究不同突变位点对酶活力的影响。结果V122A的比活为106U/mg,它的转化效率比初始酶提高23.7%。

关键词：CPC酰化酶,重叠延伸PCR,酶活,头孢菌素C,7-氨基头孢烷酸

基金资助：国家十二五重大新药科技专项(2011ZX09203-001-06)、上海市科委科技支撑项目(1343100204)资助项目