以Neprilysin蛋白酶为靶标的药物筛选模型的建立及应用

来源：中国生物工程杂志2015年第2期北京时间：

作者：田聪会, 唐延婷, 王权, 周红刚

单位：1. 天津科技大学生物工程学院 天津 300457;2. 天津市国际生物医药联合研究院 天津 300457;3. 旭和(天津)医药科技有限公司 天津 300457;4. 南开大学药学院 天津 300457

摘要：目的:建立以蛋白酶Neprilysin(NEP)为靶点的高通量药物筛选模型,应用该模型筛选抑制剂。方法:利用毕赤酵母表达系统。构建重组质粒pPICZα-A-NEP,表达载体通过与酵母菌X-33基因组染色体发生同源重组,将外源基因整合于染色体后实现目的蛋白的表达。应用荧光共振能量转移法(FRET)检测蛋白酶活性,优化反应条件,建立药物筛选体系,筛选抑制剂。结果:成功构建表达载体pPICZα-A-NEP;建立了以NEP为靶标的药物筛选模型,获得模型反应动力学参数Vmax=3.6μM/s, Kcat/Km=4.5×10Ms,测定模型Z-因子为0.89,说明体系稳定可用于以NEP为靶标的药物的高通量筛选;并用该模型对天然产物组分库进行筛选,在0.5mg/ml的药物浓度下,得到抑制率较高的药物为4种,并测得半数抑制浓度IC50值,其中MDCNCL01000242的IC50值最低,为(8.31±0.03)μg/ml。结论:建立的药物筛选模型较为理想,适用于NEP抑制剂的筛选,可促进药物的研发。

关键词：NEP,毕赤酵母表达,抑制剂,高通量筛选

基金资助：国家自然科学基金(81102374)、天津市科技支撑计划(2C2DSY03300)、天津市科技计划(132C2DSY02600)资助项目