基于HPV16 E7蛋白CTLs抗原肽的病毒样颗粒治疗性疫苗的构建

来源：中国生物工程杂志2015年第2期北京时间：

作者：褚晓杰, 李杨, 龙琼, 姚宇峰, 孙文佳, 黄惟巍, 杨旭, 刘存宝, 马雁冰

单位：1. 中国医学科学院/北京协和医学院 医学生物学研究所 昆明 650118;2. 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室 昆明 650118;3. 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心 昆明 650118

摘要：目的: 构建呈递HPV16 E7 CTLs抗原表位的病毒样颗粒,并初步评价病毒样颗粒作为治疗性疫苗载体的潜能。 方法: 根据文献选择有效的HPV16 E7 CTLs表位,合成其正负链寡核苷酸序列,并通过退火形成双链DNA片段。将片段克隆于表达乙肝核心抗原的重组质粒pThioHisA-HBcAg,使抗原肽得以呈现于病毒样颗粒。重组菌经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定目的蛋白表达。菌体破碎后经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心进行纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜鉴定病毒样颗粒的存在。制备的病毒样颗粒免疫接种了TC-1细胞的肿瘤模型小鼠,检测小鼠肿瘤大小。此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平。结果: 构建的三个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建正确。表达的重组蛋白大小与预期相符,并形成了病毒样颗粒。免疫小鼠后显示了抑制肿瘤增长的一定作用趋势。此外,抗原肽体外刺激促进了疫苗免疫小鼠脾细胞IFN-γ的表达,显示疫苗引起机体产生E7特异性的细胞免疫应答。 结论: HBcAg VLPs是有潜能的治疗性疫苗载体。

关键词：病毒样颗粒,治疗性疫苗,人乳头瘤病毒

基金资助：国家自然科学基金(31270030)、云南省面上项目(2010ZC232)、中央高校基本科研业务费(2012N08)资助项目