维氏气单胞菌B565β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的表达、纯化及酶学性质

来源：中国生物工程杂志2015年第2期北京时间：

作者：刘阳, 杨雅麟, 张宇婷, 冉超, 周志刚

单位：1. 华中农业大学水产学院 武汉 430070;2. 中国农业科学院饲料研究所 北京 100081

摘要：以维氏气单胞菌B565基因组DNA为模板,扩增得到β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 nag565基因,构建nag565 -pET28a表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。经过分析与预测, nag565 氨基酸序列与其他气单胞菌属相似,NAG565蛋白序列分析预测其含有一个信号肽、一个碳水化合物结合结构域、两个糖苷水解酶20家族催化结构域和一个β-氨基葡萄糖苷酶 C端结构域。通过Ni-NTA纯化获得的NAG565纯蛋白比活为7328U/mg,并对其酶学性质进行了初步研究,NAG565在pH7.0保持最高活性,并且在pH5.0~9.0范围内稳定,最适温度为37℃,0~30℃对其酶活无明显影响,并对多种金属离子和蛋白酶具有良好抗性,符合水产动物的养殖环境条件(养殖温度20~30℃,多数养殖鱼胃肠道pH值呈中性并含有蛋白酶),为其在水产养殖等领域的应用提供了理论基础。

关键词：维氏气单胞菌,β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,表达,酶学性质

基金资助：十二五国家科技计划农村领域项目(2013BAD10B01-2-3,2012BAD25BD203)、北京市鲟鱼、鲑鳟鱼产业技术体系项目(SCGWZJ20141104-4)、海洋公益性行业科研专项经费项目(201305022-6)资助项目