基于c-Kit+显微形态标记及流式分选分离心脏Telocytes

来源：中国生物工程杂志2015年第1期北京时间：

作者：肖虎松, 沈晓涛, 郑馨, 李艳梅, 蔡冬青

单位：1. 暨南大学再生医学教育部重点实验室 广州 510632;2. 科技部及广东省国际科技合作基地(暨南大学) 广州 510632;3. 暨南大学发育与再生生物学系 广州 510632

摘要：目的:建立基于显微形态标记及流式分选分离大鼠心脏Telocytes(CTs)的方法。方法:采用抗体c-Kit免疫磁珠法获得原代心脏Telocytes,显微注射DiI标记具\"Telopode\"典型形态的细胞,使用流式分离及回收单个DiI细胞;使用免疫荧光技术和RT-PCR方法对经回收的单个细胞来源的细胞进行表型鉴定。结果:显微注射DiI能较好地标记具Telocytes典型形态的细胞,结合流式分选及单细胞回收,能有效回收经标记的DiI细胞,经回收的DiI标记阳性Telocytes的贴壁率为14.9%,增殖率为5.6%,呈克隆样生长率为2.4%,该呈克隆样生长的细胞能通过消化传代。免疫荧光染色证明,该回收Telocytes表达其相对特异性表面标记物c-Kit和CD34,RT-PCR的结果也证明:经回收Telocytes表达其相对特异基因 c-Kit、CD34、Vimentin和PDGFR-β 。结论:研究所建立的方法能有效分离及单细胞回收高纯度的心脏Telocytes,经回收的心脏Telocytes具有增殖及传代能力,且能维持其特异表型。

关键词：心脏Telocytes,显微标记,单细胞分选

基金资助：科技部港澳台合作专项(2012DFH30060),国家自然科学基金(81170324,81470433),广东省教育厅国际合作平台项目(2012gjhz0003),广东省自然科学基金重点项目(S2012020010895),广东省科技厅国际合作平台项目(2013B051000062)资助项目