拟南芥双油体蛋白融合表达KGF-2及其生物学活性研究

来源：中国生物工程杂志2015年第1期北京时间：

作者：艾君, 姜潮, 刘敏, 王晓艳, 田海山, 李校堃

单位：1. 温州医科大学药学院 浙江省生物技术与制药工程重点实验室 温州 325035;2. 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心 长春 130118

摘要：目的:构建p1301-YO-K2-YO双油体KGF-2融合蛋白表达载体并转化拟南芥,与p1301-YO-K2单油体KGF-2融合蛋白表达载体对比,观察是否能够提高外源蛋白KGF-2的表达量,并对融合蛋白生物学活性进行鉴定。方法:PCR获得拟南芥油体蛋白oleosin和KGF-2核心区基因片段,融合PCR获得 KGF-2-oleosin 融合基因,与包含有一个oleosin的p1301-oleosin载体连接,构建p1301-YO-K2-YO(oleosin-KGF-2-oleosin)表达载体,利用农杆菌介导法将其转入拟南芥中进行表达,除草剂筛选获得转基因植株,通过PCR鉴定、SDS-PAGE、Western blot对KGF-2蛋白表达进行分析,提取油体蛋白涂抹法观察对C57BL/6小鼠的毛囊促生长作用。结果:双油体载体成功转入拟南芥基因组中;Western blot灰度分析可知,与单油体表达载体p1301-YO-K2相比,双油体融合表达策略可使KGF-2蛋白表达量提高2.5倍左右;动物实验结果表明油体融合蛋白具有良好的促毛囊增殖活性。

关键词：拟南芥,角质细胞生长因子-2,双油体KGF-2 融合蛋白

基金资助：浙江省自然科学基金(LY13H300006),2012年省级重点科技创新团队项目(2012R1004210),吉林省科技型中小企业创新基金(13C26212201223)资助项目