一种降解赭曲霉毒素A的羧肽酶酶原在毕赤酵母中的表达

来源：中国食品学报杂志2015年第6期北京时间：

作者：师磊; 许文涛; 田晶晶; 黄昆仑; 梁志宏

单位：师磊; 许文涛; 田晶晶; 黄昆仑; 梁志宏中国农业大学食品科学与营养工程学院;营养健康与食品安全北京市重点实验室;,

摘要：目的:获得能降解赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的重组蛋白羧肽酶A(r CPA)。方法:按照巴斯德毕赤酵母密码子偏爱性合成羧肽酶A酶原(Pro CPA)基因,构建重组质粒p PIC9K/Pro CPA,线性化后电转导入毕赤酵母GS115中,抗生素G418筛选获得高拷贝转化子。甲醇诱导表达5 d,上清用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析,基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定。重组羧肽酶A酶原(r Pro CPA)用TPCK处理的胰蛋白酶酶解,酶解产物r CPA降解OTA,高效液相色谱(HPLC)测定降解率。结果:成功构建毕赤酵母重组菌株GS115/p PIC9K/Pro CPA。SDS-PAGE表明r Pro CPA分子质量与理论值一致,MALDI-TOF证实为牛胰脏Pro CPA,甲醇诱导表达5 d后上清的总蛋白含量190 mg/L。Band Scan软件估计r Pro CPA占上清的80%,含量为150 mg/L。酶解产物r CPA能降解OTA,当OTA质量浓度为4μg/m L时,降解率为72.3%。HPLC显示有降解产物OTα产生。

关键词：赭曲霉毒素A;r Pro CPA;降解;毕赤酵母GS115

基金资助：北京市科技计划项目(D121100003112001,D121100003112004)