中国人乳β-酪蛋白基因克隆表达及生物信息学分析

来源：中国食品学报杂志2015年第8期北京时间：

作者：任皓威; 李春; 刘宁; 顾鑫

单位：任皓威; 李春; 刘宁; 顾鑫国家乳业工程技术研究中心黑龙江省乳品工业技术开发中心;乳品科学教育部重点实验室东北农业大学食品学院;食品安全与营养协同创新中心;,

摘要：文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象。为探究中国人乳β-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织,提取总RNA,并以其为模板,通过RT-PCR方法扩增人乳β-酪蛋白的编码区(CDS)基因,连接T载体测序,然后提交至Gen Bank(登录号:KF 751868)。与NCBI上人β-酪蛋白的核苷酸序列比较,所得人乳β-酪蛋白CDS序列同源性达到100%,说明该基因在不同人种间具有高度保守性。由其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果:理论等电点(p I)5.52,该蛋白质不存在跨膜结构,具有较强的疏水区域。连接重组质粒和PET-30a-GST载体后,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,37℃诱导4 h,目标重组蛋白以包涵体形式表达,通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,经SDS-PAGE验证,成功构建原核表达载体PET-30a-GST-CSN2,并获得重组人乳β-酪蛋白。这为进一步研究中国人乳β-酪蛋白奠定良好的基础。

关键词：β-酪蛋白;基因;克隆;序列分析

基金资助：“十二五”国家科技支撑计划(2011BAD09B03)项目; 食品安全与营养协同创新中心项目