草鱼肌肉脯氨酸内肽酶的研究

来源：中国食品学报杂志2015年第9期北京时间：

作者：翁凌; 林韵; 张玲; 张凌晶; 颜龙杰; 刘光明; 曹敏杰

单位：翁凌; 林韵; 张玲; 张凌晶; 颜龙杰; 刘光明; 曹敏杰集美大学食品与生物工程学院;福建省水产品深加工工程研究中心;,

摘要：脯氨酸内肽酶（Prolyl endopeptidase,PEP）是一类能够特异性水解低分子质量多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的内切酶,与胶原蛋白的后期降解有密切关系。以淡水鱼草鱼为原料,采用硫酸铵分级沉淀,DEAESephacel阴离子交换,Phenyl-Sepharose疏水层析和羟基磷灰石层析等方法从草鱼肌肉中分离纯化得到一种脯氨酸内肽酶。SDS-PAGE结果显示,草鱼PEP的分子质量为75 ku。酶学性质分析表明,其最适p H为6.0,在p H5.5～7.5间有较好的稳定性。酶的最适温度为30℃,其热稳定性较差。PEP能够特异性分解肽链羧基端为脯氨酸残基的荧光底物,PEP的特异性抑制剂SUAM以及丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟对其有强烈的抑制作用。酶动力学研究表明,草鱼PEP的Km为19.23μmol/L,kcat为2.5 s-1。肽指纹质谱分析结果表明,草鱼PEP与青鱂鱼、罗非鱼、斑马鱼PEP的序列同源性分别为98.3%,96.1%和94.4%。

关键词：脯氨酸内肽酶;草鱼;纯化;性质分析

基金资助：国家自然科学基金项目(31071519); 十二五国家科技支撑计划(2012BAD38B09)