EMA RT-PCR法检测鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌

来源：中国食品学报杂志2015年第10期北京时间：

作者：颜成英; 汤晓艳; 康大成; 李朋颖; 龚艳

单位：颜成英; 汤晓艳; 康大成; 李朋颖; 龚艳中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室;南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室;,

摘要：目的:叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)具有特异性抑制死菌DNAPCR扩增而对活菌细胞无影响的特点,将其应用于鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌检测。方法:待测样品中加入EMA至终质量浓度为50μg/m L,卤素灯曝光处理10 min,提取DNA进行RT-PCR反应,根据Ct值和标准曲线计算样品中活菌的数量。结果:相同细胞浓度条件下,活菌经EMA处理后其Ct值与未经EMA处理组的Ct值无显著性差异(P>0.05),且细胞浓度与Ct值均呈显著负相关性,相关系数分别是0.9916和0.9832;死菌经EMA处理后其Ct值与活菌经EMA处理后的Ct值有显著性差异(P﹤0.05),而与阴性对照组无显著性差异(P>0.05);死/活鼠伤寒沙门氏菌混合菌液污染鸡肉样品检测结果显示,与直接RT-PCR方法相比,EMART-PCR方法的检测结果更接近于平板计数结果。结论:EMA与RT-PCR相结合的方法可以快速、准确地检测鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌的数量,避免假阳性结果,具有实用意义。

关键词：叠氮溴乙锭;逆转录-聚合酶链式反应;鼠伤寒沙门氏菌;鸡肉

基金资助：“十二五”国家科技支撑计划项目(2012BAD28B03); 现代农业产业技术体系专项(CARS-42); 国家自然科学基金项目(31000799)