铜绿假单胞菌重要外毒素基因多重PCR检测方法的建立

来源：中国食品学报杂志2015年第11期北京时间：

作者：石慧; 程国灵; 许文涛; 罗云波

单位：石慧; 程国灵; 许文涛; 罗云波西南大学食品科学学院;中国农业大学食品科学与营养工程学院;,

摘要：铜绿假单胞菌是一种重要的机会致病菌,Ⅲ型分泌系统、绿脓菌素、弹性蛋白酶和外毒素A是其重要的致病因子。不同铜绿假单胞菌株呈现出高度的基因多样化,导致一些菌株缺乏部分毒素基因。为判断铜绿假单胞菌株毒性,建立了一种多重PCR的检测方法,检测其内标基因ecf X和5种重要的外毒素基因(tox A,phz M,las B,exo U和exo S)。结果引物特异性良好,通过引物浓度优化,多重PCR反应中最低检出限达5 pg。通过此方法成功筛查到不同铜绿假单胞菌株中毒素基因缺失情况。其中,菌株PAO1、PAK、PKE 117和ACCC 10647缺失exo U,菌株PA103和PA14缺失exo S,菌株PAK缺失las B。这种快速、简便的多重PCR方法可在今后常规监察或疾病暴发时检测铜绿假单胞菌株毒素基因,以此判断其毒力和致病性。

关键词：铜绿假单胞菌;多重PCR;外毒素基因

基金资助：国家自然科学基金-青年基金项目(31401567); 中央高校基本科研业务费专项(XDJK2014B020); “十一五”国家科技支撑计划项目(2011BAK10B02)