重组大肠杆菌内PDC和ADH表达条件优化

来源：中国食品学报杂志2015年第11期北京时间：

作者：叶广彬; 葛菁萍; 秦锐; 宋刚; 平文祥

单位：叶广彬; 葛菁萍; 秦锐; 宋刚; 平文祥微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院;右江民族医学院科学实验中心;,

摘要：丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶II可将丙酮酸定向转化成乙醇。将已构建的含有丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶II基因的表达载体p ET-28a(+)-pdc-RBS-adh B转入大肠杆菌BL21中,实现在大肠杆菌体内高产乙醇的目的。对该工程菌株进行定性检测,优化诱导表达条件,定量检测,SDS-PAGE分析和做发酵试验,结果表明丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶II的最佳表达条件为IPTG浓度1.0 mmol/L,诱导时间7 h,诱导温度37℃。其最大酶活分别为1.34 U/mg和3.88 U/mg。重组子利用葡萄糖、木糖和混合糖发酵。在葡萄糖中发酵72 h,获得最大乙醇产量6.86 g/L,最高乙醇得率0.40 g/g。

关键词：大肠杆菌;丙酮酸脱羧酶;乙醇脱氢酶Ⅱ

基金资助：国家自然科学基金面上项目(31270534);国家自然科学基金项目(31270143);国家自然科学基金-青年科学基金项目(31300355); 黑龙江省高等学校科技创新团队(2012td009)