基因序列比对法验证实时荧光定量PCR阳性结果真伪

来源：中国食品学报杂志2016年第4期北京时间：

作者：武娟; 曹斌斌; 李丹; 张祺; 左涛; 赵玉然; Uyttendaele Mieke; 薛长湖; 唐庆娟

单位：武娟; 曹斌斌; 李丹; 张祺; 左涛; 赵玉然; Uyttendaele Mieke; 薛长湖; 唐庆娟中国海洋大学食品科学与工程学院食品科学与人类健康实验室;根特大学生物工程学院食品安全与食品质量系食品微生物与食品保藏实验室;山东出入境检验检疫局技术中心动物检疫科;,

摘要：实时荧光定量PCR(q PCR)是检测食源性病毒的常用方法,其高度的灵敏性导致检测过程中容易产生假阳性结果。基因序列比对法是比利时根特大学食品微生物与食品保藏实验室新近建立的验证q PCR阳性结果真伪的一种方法。本研究以检测贝类诺如病毒GII.4(No V GII.4)为例,采用基因序列比对法验证q PCR阳性结果的真伪。在q PCR检测时添加102copies/m L的No V GII.4质粒作为标准阳性对照,旨在排除由于q PCR的高灵敏性而产生的假阳性结果。研究结果表明,在8份No V阳性的贝类样品中,2份为No V GII.4真阳性,2份可能为No V GII.4的变异株,1份为受到质粒污染的假阳性,其余3份为引物二聚体所致假阳性。基因序列比对法作为一种验证q PCR阳性结果真伪的高效、可行的方法,值得推广。

关键词：实时荧光定量PCR;假阳性;诺如病毒GII.4;基因序列比对

基金资助：国家自然科学基金资助项目(31101281); 长江学者和创新团队发展计划资助(IRT1188); Joint Sino-Belgian Project on Detection of Infectious Noroviruses in Shellfish and AntiViral Potential Study of Seafood(BL/02/C57)