环介导等温扩增技术检测醋化醋杆菌

来源：中国食品学报杂志2016年第5期北京时间：

作者：周巍; 付晓华; 章晶晶; 杨岚; 王红; 张岩; 张志胜

单位：周巍; 付晓华; 章晶晶; 杨岚; 王红; 张岩; 张志胜河北农业大学食品科技学院;河北省食品质量监督检验研究院河北省食品安全重点实验室;河北师范大学生命科学院;,

摘要：为实现醋酸菌的快速灵敏检测,以醋化醋杆菌为代表菌株,首次使用环介导等温扩增技术(LAMP)进行16S-23S ITS r RNA核酸扩增,通过特异性检测后对反应条件进行优化,并对扩增产物的检测方法进行比较。结果表明,该组引物特异性强,优化的25μL体系为:6 mmol/L Mg Cl2,1.4 mmol/L d NTPs,内引物(FIP和BIP)各0.8μmol/L,外引物(F3和B3)各0.2μmol/L,1×Bst DNA聚合酶反应缓冲液,8U Bst DNA聚合酶,0.8 mmol/L甜菜碱,2μL DNA模板,用灭菌蒸馏水补足体系。62℃反应30 min即可完成扩增反应,产物经琼脂糖凝胶电泳后检测灵敏度达3.63×101CFU/m L。用肉眼观察白色焦磷酸镁沉淀,仅观察到3.63×102 CFU/m L以上的阳性产物,而在终产物中加入10 000×0.1μL SYBR GreenⅠ后,可通过肉眼观察产物颜色变化,得到与琼脂糖凝胶电泳法相同的检出限,并且缩短了检测时间。

关键词：醋酸菌;醋化醋杆菌;LAMP;灵敏度;产物检测

基金资助：河北省质量技术监督局科技计划项目(100108)