德式乳杆菌保加利亚亚种分解代谢控制蛋白CcpA基因敲除突变株的构建

来源：中国食品学报杂志2016年第6期北京时间：

作者：孙金威; 刘丽波; 祁昕; 杨鹤; 龚娅莉; 李春

单位：孙金威; 刘丽波; 祁昕; 杨鹤; 龚娅莉; 李春东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室;,

摘要：在革兰氏阳性菌中,分解代谢控制蛋白(Ccp A)是一种参与碳代谢和氮代谢的多效调控蛋白。利用同源重组技术,以德式乳杆菌保加利亚亚种为研究对象,构建Ccp A基因敲除突变株。首先以德式乳杆菌保加利亚亚种ATCC11842基因组DNA和质粒p BR322为模板,扩增Ccp A基因和四环素抗性基因(Tet),然后分别将Ccp A基因和Tet基因连接到载体p Back Zero-T Vector上,再对中间载体p Back Zero-Ccp A和p Back Zero-Tet进行双酶切,回收纯化双酶切后的目的片段并连接获得Ccp A基因敲除的重组载体p CT。通过同源重组筛选Ccp A基因敲除突变株,菌落PCR和测序鉴定结果均显示Ccp A基因敲除突变株构建成功,这为阐明该调控蛋白在德式乳杆菌保加利亚亚种代谢过程中的作用奠定了基础。

关键词：分解代谢控制蛋白;德式乳杆菌保加利亚亚种;基因敲除;突变株

基金资助：国家自然科学基金项目(31201397); 乳品科学教育部重点实验室开放课题(2012KLDSOF-06)