凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达及性质研究

来源：中国食品学报杂志2016年第7期北京时间：

作者：詹春兰; 王慈; 翁凌; 蔡秋凤; 刘光明; 曹敏杰

单位：詹春兰; 王慈; 翁凌; 蔡秋凤; 刘光明; 曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心;,

摘要：通过PCR扩增得到凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)基因,将其插入大肠杆菌表达载体p ET-28a,实现丝氨酸蛋白酶抑制剂在BL21(DE3)菌中以包涵体的形式大量表达。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量约为15 ku,与预期大小一致。将包涵体溶解后,利用Ni2+亲和柱层析对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组SPI。经复性后的SPI对胰蛋白酶具有较高的抑制活性。该抑制剂在90℃内加热1 h,可保留90%以上的抑制活性,且在p H 1～8范围内较稳定。该抑制剂能特异性抑制凡纳滨对虾内源性胰蛋白酶的活性。抑制动力学试验结果表明,该抑制剂是竞争性抑制剂,其抑制常数Ki为1.69×10-9mol/L。结论:重组凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂具有较高的抑制活性且较稳定,经优化表达条件后有望应用于新型对虾保鲜剂。

关键词：凡纳滨对虾;丝氨酸蛋白酶抑制剂;原核表达