苦瓜核糖核酸酶的分离纯化与性质分析

来源：中国食品学报杂志2017年第1期北京时间：

作者：林岱; 吴文峰; 柯李晶; 周建武; 饶平凡

单位：林岱; 吴文峰; 柯李晶; 周建武; 饶平凡浙江工商大学食品与生物工程学院;福州大学生物工程研究所;,

摘要：目的:分离纯化苦瓜核糖核酸酶,并进行酶学性质及生物学性质研究,为其生物活性蛋白研究提供依据。方法:采用乙醇沉降、C18反相高效液相色谱、Tricine-SDS-PAGE和等电聚焦等方法分离纯化与鉴定,以酵母tRNA为底物测定核糖核酸酶酶活性。结果 :从苦瓜中分离纯化获得一种核糖核酸酶,命名为MC-RNase。Tricine-SDS-PAGE和C18反相液相色谱鉴定表明该酶具有较高纯度。其N-端氨基酸序列为VNEFDYYQVVLQWQPAT,相对分子质量为14 ku,等电点PI值为8.1;酶学性质表明,该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5,金属离子Zn2+、Fe2+、Fe3+、Mg2+对该酶均有抑制作用,而Pb2+可以增强该酶活性;细胞试验结果表明,该酶对人正常细胞L-02及肝癌细胞Hep-G2并没有明显的抑制作用。结论:从新鲜苦瓜组织中分离并鉴定出一种新的核糖核酸酶。

关键词：苦瓜;分离纯化;核糖核酸酶;表征