食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶的克隆、表达及酶学性质

来源：中国食品学报杂志2017年第3期北京时间：

作者：殷勤; 肖安风; 倪辉; 蔡慧农; 朱艳冰

单位：殷勤; 肖安风; 倪辉; 蔡慧农; 朱艳冰集美大学食品与生物工程学院;福建省食品微生物与酶工程重点实验室;厦门市食品与生物工程技术研究中心;厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室;,

摘要：目的:在大肠杆菌中高效表达食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶基因,并对重组酶的酶学性质进行研究,为开发酶法去除琼脂硫酸酯的技术奠定基础。方法:通过PCR克隆芳香基硫酸酯酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,并对重组酶的酶学性质进行研究。结果:从食鹿角菜交替假单胞菌克隆得到芳香基硫酸酯酶基因(987 bp),预测编码328个氨基酸残基。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达和纯化,SDS-PAGE分析显示,重组酶的分子质量为35.1 ku。以对硝基苯硫酸钾(p-NPS)为底物,酶的比活力达26.7 U/mg,最适反应温度50℃和最适反应pH 7.0,Km为0.65 mmol/L,Vmax为19.99μmol/(mg·min)。除了SDS,重组酶对其他测试的抑制剂和去垢剂具有一定的抗性。重组芳香基硫酸酯酶和龙须菜粗多糖在40℃反应2 h,酶解产物凝胶强度提高2.1倍,可脱除多糖84.9%的硫酸基团。结论 :重组芳香基硫酸酯酶能有效脱除龙须菜粗多糖的硫酸基团,为开发环保、高效的酶法琼脂生产技术奠定基础。

关键词：食鹿角菜交替假单胞菌;芳香基硫酸酯酶;克隆;表达;酶学性质

基金资助：国家自然科学基金项目(31401632); 福建省高校新世纪优秀人才支持计划(B15139)