骆驼凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的重组表达

来源：中国食品学报杂志2017年第12期北京时间：

作者：徐龙龙; 刘思彤; 任永成; 惠丰立

单位：徐龙龙; 刘思彤; 任永成; 惠丰立南阳师范学院生命科学与技术学院;,

摘要：骆驼凝乳酶具有独特的凝乳特性,在干酪加工制作中具有潜在应用前景。为获得高活性的骆驼凝乳酶制剂,采用乳酸克鲁维酵母GG799为宿主,首次对经密码子优化的骆驼凝乳酶原(c PC)基因进行表达。将人工合成cPC基因插入乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC1,构建重组载体pKLAC1-c PC,并用电脉冲法将SacⅡ线性化的重组质粒转化到乳酸克鲁维酵母GG799中。通过含1%酪蛋白的YEPD平板活性筛选,全细胞PCR鉴定,最后获得一株多拷贝整合的基因工程菌cPC 1。该菌株可分泌表达cPC,经SDS-PAGE分析,重组cPC的分子质量约为41 ku,符合预期;酸化处理后cPC的分子质量约为36 ku,可正确自我剪切。摇瓶发酵培养120h,酶活最高达230 SU/m L。分别以牛乳、骆驼乳和牦牛乳作为底物检测酶活性,结果重组骆驼凝乳酶对3种动物乳均具有凝乳活性。

关键词：骆驼凝乳酶;乳酸克鲁维酵母;分泌表达

基金资助：国家自然科学基金项目(31370073); 河南省基础与前沿技术研究计划(102300410146)