假单胞菌的聚-β-羟基丁酸酯聚合酶基因的克隆与表达

来源：中国食品学报杂志2018年第4期北京时间：

作者：刘俊梅; 王庆; 王丹; 杨盼盼; 丁伟; 朴春红; 王玉华; 于寒松

单位：刘俊梅; 王庆; 王丹; 杨盼盼; 丁伟; 朴春红; 王玉华; 于寒松吉林农业大学食品科学与工程学院;吉林医药学院;,

摘要：根据Gen Bank上公布的假单胞菌属的phb C基因设计引物。以假单胞菌UVCN18基因组DNA为模板,成功克隆了菌株假单胞菌UVCN18中的PHB聚合酶基因phb C。生物信息学方法分析表明,该基因全长1 704 bp,编码567个氨基酸。通过Blast P序列对比发现,该基因所表达的氨基酸属于PHA聚合酶家族。将获得的基因序列提交到Gen Bank,得到登录号为KT716020。采用MEGA5.1软件构建系统发育树,显示该基因编码的氨基酸序列与菌种恶臭假单胞菌所表达的氨基酸序列的同源性较高。同时构建工程菌大肠杆菌BL21-p ET-28a(+)-phb C,经IPTG诱导过量表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定结果与PHB聚合酶分子质量63 ku理论相符合,证明实现了异源蛋白表达。

关键词：假单胞菌;克隆与表达;PHB