重组菌BL21-HTa-cgkZ产κ-卡拉胶酶的分离纯化

来源：中国食品学报杂志2018年第5期北京时间：

作者：杨敏; 田琳; 刘哲民; 牟海津

单位：杨敏; 田琳; 刘哲民; 牟海津中国海洋大学食品科学与工程学院;,

摘要：研究了重组菌BL21-HTa-cgk Z产κ-卡拉胶酶的分离纯化技术。在发酵罐中制备粗酶液,将粗酶液沉淀、阴离子交换层析、超滤浓缩和葡聚糖凝胶过滤层析,得到高纯度的κ-卡拉胶酶。通过对沉淀剂、沉淀时间、沉淀pH的单因素试验确定κ-卡拉胶酶的最优沉淀条件,即:沉淀剂40%的乙醇,沉淀时间4 h,沉淀pH 6.0。通过各级分离纯化,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳分子质量为62 ku的条带,经LC-MS/MS鉴定,确定该条带为含有κ-卡拉胶酶的条带。测定纯化后的κ-卡拉胶酶酶活,结果显示,κ-卡拉胶酶的比活力为94.23 U/mg,纯化倍数12.33倍。重组菌BL21-HTa-cgk Z发酵产生的κ-卡拉胶酶,经各级分离纯化,得到高纯度的κ-卡拉胶酶,为卡拉胶酶的食品工业化应用奠定了基础。

关键词：重组菌BL21-HTa-cgkZ;κ-卡拉胶酶;沉淀;分离纯化

基金资助：山东省科技发展计划项目(2014GHY115037); 国家海洋局海洋公益性行业科研专项(201505022); 中央高校基本科研业务费基础性工作专项基金项目(201362041)