多种绿色DNA嵌入染料实时荧光PCR检测猪DNA效果比较

来源：中国食品学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：杨艳; 王桂姬; 周广运; 任皓威; 夏秀芳; 刘宁

单位：杨艳; 王桂姬; 周广运; 任皓威; 夏秀芳; 刘宁东北农业大学食品学院;,

摘要：实时荧光定量PCR是食品科学领域一种高效、灵敏的研究技术,荧光染料的种类和浓度会对实时PCR反应产生一定影响。以8种绿色荧光DNA嵌入染料SYTO 11～14,SYTO 16,SYTO 21,SYTO 24～25为研究对象,体系选择荧光染料浓度分别为10,5,2,1,0.5μmol/L,以从猪肉中提取的基因组DNA为模板进行扩增,产物长度149 bp。通过分析Ct值和熔解曲线,评价染料浓度对扩增效果的影响,初步筛选出最适染料及相应浓度:SYTO 11（5μmol/L,2μmol/L）,SYTO 13（10μmol/L,5μmol/L）,SYTO 16（10μmol/L,5μmol/L）,SYTO 21（1μmol/L）和SYTO 24（0.5μmol/L）。根据筛选结果自配反应预混液,以2种商业实时荧光PCR预混液为参照,通过模板10倍梯度稀释绘制标准曲线,计算扩增效率,R2均大于0.99,线性范围均在40 ng0.04 pg之间,其中染料SYTO 13（10μmol/L）和SYTO 16（10μmol/L,5μmol/L）扩增效率分别为99.35%,100.50%和99.71%,接近商业试剂盒2（BYRT染色,扩增效率99.61%）,高于商业试剂盒1（Evagreen染色,扩增效率97.80%）,具有实际应用价值。

关键词：实时荧光PCR;DNA嵌入染料;猪DNA

基金资助：黑龙江省应用技术与开发计划(重大项目)(GA15B302)