疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达和性质鉴定

来源：中国食品学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：蔡海莺; 张婷; Dumba Trish; 赵敏洁; 李杨; 童志超; 毛建卫; 张辉; 冯凤琴

单位：蔡海莺; 张婷; Dumba Trish; 赵敏洁; 李杨; 童志超; 毛建卫; 张辉; 冯凤琴浙江省农业生物资源生化制造协同创新中心浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室浙江科技学院生物与化学工程学院;浙江大学生物系统工程与食品科学学院;,

摘要：通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体p PIC9K中。结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/m L,对应的p NPP水解酶活达到312.72U/m L。与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/m L)相比,密码子优化后酶活提高74.29%,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达。比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适p H和温度耐受范围。另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力。

关键词：疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶;重组表达;密码子优化;性质鉴定;sn-1,3位置专一性;毕赤酵母

基金资助：浙江省重大科技专项(2012C12005-2); 浙江省重点研发计划(2017C02009); 浙江省自然科学基金一般项目(LY18C200006); 浙江省教育厅科研一般项目(Y201737161)