一株产低温脂肪酶沙雷氏菌的鉴定、基因表达及酶学性质

来源：中国食品学报杂志2018年第6期北京时间：

作者：刘元利; 陈吉祥; 李彦林; 周敏; 程琳

单位：刘元利; 陈吉祥; 李彦林; 周敏; 程琳兰州理工大学石油化工学院;,

摘要：采用罗丹明B平板法从青海污染原油筛选到一株脂肪酶高产菌株LHY-1。根据培养特征、生理生化及16S r DNA序列分析,初步鉴定LHY-1为沙雷氏菌。其最佳生长和产脂肪酶的碳源、氮源分别是牛肉膏和酵母粉,最适温度20℃,初始p H 7.0,在盐度9%的培养基中生长,优化培养条件后产脂肪酶可达1 326 U/m L。用特异性引物从LHY-1基因组克隆脂肪酶基因,构建表达载体p ET-28a(+)/lipase,在大肠杆菌高效表达,用NiNTA琼脂糖亲和柱纯化的蛋白分子质量为36 ku。重组脂肪酶最适温度为30℃,在4～30℃时表现出较大酶活力,属低温脂肪酶。该酶在p H 7.0～11.0范围稳定,30℃保持1 h,酶活力维持75%。Mg2+、Ca2+对酶活力有一定的促进作用。Co2+、Zn2+、SDS、PMSF、EDTA、EGTA对酶有部分抑制作用。纯化的脂肪酶能催化大豆油和乙醇酯交换反应,用于生物柴油的催化合成。

关键词：沙雷氏菌;低温脂肪酶;基因;克隆;性质;生物柴油

基金资助：国家自然科学基金项目(31272694)