轮状病毒核酸标准物质研究

来源：中国食品学报杂志2018年第7期北京时间：

作者：徐蕾蕊; 魏海燕; 马丹; 汪琦; 张西萌; 李丹; 付溥博; 刘莉; 魏咏新; 赵晓娟; 孙震; 曾静

单位：徐蕾蕊; 魏海燕; 马丹; 汪琦; 张西萌; 李丹; 付溥博; 刘莉; 魏咏新; 赵晓娟; 孙震; 曾静北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心;,

摘要：目的:研制用于食品中轮状病毒聚合酶链式反应检测的核酸标准物质。方法:从RV阳性粪便样品中提取RNA后,利用基因克隆体外转录方法制备RV cRNA纯品,均匀性初检后,稀释至10-4后分装,制备RV核酸标准物质样品。cRNA经核酸测序确定同源性后,采用微滴式数字PCR方法进行均匀性和稳定性研究。RV核酸标准物质的标准值由多家实验室应用ddPCR联合定值获得,并进行不确定度分析。结果:均匀性结果显示RV核酸标准物质组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义(P<0.05)。稳定性检验表明室温(20～25℃)3 d,4℃7 d,-20℃21 d及-80℃6个月样品cRNA含量无显著变化。定值研究和不确定度评价得RV核酸标准物质的标准值为6.60×10～7拷贝/μL,其扩展不确定度为0.60×10～7拷贝/μL。结论:RV核酸标准物质均匀性和稳定性符合二级标准物质技术规范,可作为RV PCR检测的标准物质。

关键词：轮状病毒;核酸;数字聚合酶链式反应;标准物质

基金资助：国家质检总局科技计划项目(2016IK017); “十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0401102)