多基因整合型载体转化酿酒酵母生物合成白藜芦醇

来源：中国食品学报杂志2018年第9期北京时间：

作者：黄佳俊; 林俊芳; 孙萍; 梁景龙; 叶志伟; 郭丽琼

单位：黄佳俊; 林俊芳; 孙萍; 梁景龙; 叶志伟; 郭丽琼华南农业大学食品生物技术研究所华南农业大学食品学院生物工程系;,

摘要：目的:以整合型载体p RS303K为框架,以来源于拟南芥的4-香豆酰辅酶A连接酶基因(4cl)和巨峰葡萄的白藜芦醇合酶基因(rs)为目标基因,采用一步等温法构建了表达白藜芦醇的整合型酵母表达载体p RS303KT4C-TRC。方法:采用Li Ac/SS carrier DNA/PEG转化法把表达载体成功转化酿酒酵母工业型菌株EC1118,经筛选和PCR鉴定获得酵母工程菌株EC1118-303K-T4C-TRC。酵母工程菌株采用添加和不添加抗生素的发酵培养。结果:在培养基添加抗生素和不加抗生素的发酵液中白藜芦醇的含量分别为3.4110 mg/L和3.4710 mg/L,两者差异不显著。结论:两个关键酶基因成功整合到酵母的染色体基因组中并得到表达,工程菌株在传代中不受选择压力影响,稳定组合表达白藜芦醇。

关键词：白藜芦醇;酿酒酵母;生物合成;基因表达;整合型表达载体

基金资助：国家自然科学基金项目(31272217,31372116); 广东省科技攻关项目(2013B010404041)