TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌

来源：中国食品学报杂志2024年第5期北京时间：

作者：艾鹏飞，王珊，高辉明，王雁伟，庞艳荣，张萌

单位：艾鹏飞河北科技大学食品与生物学院 石家庄 050018,王珊河北科技大学食品与生物学院 石家庄 050018,高辉明河北科技大学食品与生物学院 石家庄 050018,王雁伟河北科技大学食品与生物学院 石家庄 050018,庞艳荣河北科技大学食品与生物学院 石家庄 050018,张萌河北科技大学食品与生物学院 石家庄 050018,

摘要：建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针，建立多重qPCR反应体系，进行灵敏度、特异性和稳定性试验，同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明，建立的多重qPCR方法灵敏度高，最低检出限为12 CFU/mL；特异性强，只对3种目标菌进行PCR扩增；稳定性好，各重复性试验中Ct值的变异系数<1%；所有受污染样品阳性检出率均为100%，与国家标准方法检测结果一致，且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌，为食品安全提供技术支撑。

关键词：TaqMan探针; 多重实时定量PCR; 大肠杆菌O157:H7; 单增李斯特菌; 蜡样芽孢杆菌

基金资助：河北省重点研发计划项目(19227137D)；河北省大中学生科技创新能力培育专项(22E50074D)