跨越式滚环等温扩增双染料比色法检测食品中的沙门氏菌

来源：中国食品学报杂志2025年第1期北京时间：

作者：孙艳玉，李子坤，张蕴哲，徐慧，卢鑫，张伟

单位：孙艳玉河北农业大学食品科技学院 河北保定 071000,李子坤河北农业大学 河北保定 071000,张蕴哲河北农业大学食品科技学院 河北保定 071000,徐慧河北农业大学理工系 河北沧州 061100,卢鑫河北农业大学理工系 河北沧州 061100,张伟河北农业大学食品科技学院 河北保定 071000;河北农业大学生命科学学院 河北保定 071000;河北省人畜共患病原微生物分析与防控重点实验室 河北保定 071000,

摘要：沙门氏菌是导致腹泻病的四大原因之一，对人类健康危害极大。本研究基于甲酚红(CR)和羟基萘酚蓝(HNB)的不同作用模式和显色原理，建立一种跨越式滚环等温扩增(SRCA)双染料比色法，用于沙门氏菌的可视化检测。首先针对沙门氏菌设计SRCA引物组，然后优化双染料添加量，建立SRCA双染料比色检测方法。通过特异性、灵敏度和检出限试验，对该方法进行评估。通过检测60份实际样品，评价该方法的实际应用性能。结果表明:HNB/CR最佳浓度比为0.6，即HNB浓度为75 μmol/L，CR浓度为125 μmol/L。用该方法检出8株沙门氏菌为阳性，其余15株非沙门氏菌菌株均为阴性。该方法灵敏度为6.8 CFU/mL，是PCR方法(6.8×102 CFU/mL)的100倍。检出限为9.5 CFU/mL，比PCR方法(9.5×102 CFU/mL)低100倍。检测实际样品，计算其敏感性、特异性和符合率分别为100%，98.2%，98.3%。本研究建立的SRCA双染料比色方法能够特异、准确、灵敏地检测沙门氏菌。与使用单一染料相比，双染料混合使用使阴性(紫色)与阳性(绿色)样品间具有更高的色相对比度和更广的颜色变化范围。此外，比色染料可预先加入反应体系之中，能有效避免二次污染。

关键词：跨越式滚环等温扩增; 双染料; 比色检测; 沙门氏菌

基金资助：国家自然科学基金项目(32172288，31371772)；河北省自然科学基金重点项目(C2019204342)；中央引导地方科技发展资金项目(216Z5501G，226Z5503G，236Z5502G)；河北省外专百人计划项目(360-0803-JSN-3YGS)；河北省博士后科研项目(B2021005007)；河北省重点研究开发计划项目(18275501D)；河北省教育厅科研项目(QN2022073)；河北省自然科学基金项目(C2019204284)