现制直饮品中铜绿假单胞菌的ERA快速检测

来源：中国食品学报杂志2025年第4期北京时间：

作者：赵健淞，杨艳歌，刘通，魏莹，李红娜，李涛，孙冬梅，袁飞

单位：赵健淞黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院 黑龙江大庆 163000;中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室食品质量与安全 北京 100176,杨艳歌中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室食品质量与安全 北京 100176,刘通中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室食品质量与安全 北京 100176,魏莹黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院 黑龙江大庆 163000;中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室食品质量与安全 北京 100176,李红娜中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室食品质量与安全 北京 100176,李涛中国检验检疫科学研究院 国家市场监管重点实验室食品质量与安全 北京 100176,孙冬梅黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院 黑龙江大庆 163000,

摘要：目的:为实现现制直饮品中铜绿假单胞菌的快速检测，开发基于酶促重组等温扩增(ERA)技术的荧光检测法和试纸条检测法。方法:以铜绿假单胞菌的弹性蛋白酶编码(lasB)基因为靶标基因设计引物探针，建立两种基于ERA的快速检测方法(荧光检测法、试纸条检测法)。通过系统验证试验，对检测系统的特异性、灵敏度、实际样本适用性等性能指标进行全面评估。结果:所建方法对铜绿假单胞菌展现出良好的特异性和包容性。在灵敏度方面，对于目标DNA的检测下限分别达到10-1 ng/μL和10-3 ng/μL。人工污染结果显示，荧光检测法和试纸条检测法分别通过6 h和4 h短时前增菌，最低检出限可达1 CFU/mL。采用上述方法检测20份市售样品，结果显示:10份样品呈阳性，阳性符合率达50%。与国家标准GB 8538-2022的比对分析显示准确率达100%，证实此方法在饮品基质中的稳定性和检测结果的准确性。结论:基于ERA技术构建的铜绿假单胞菌双模式快速检测方法(荧光检测法和试纸条检测法)，于37 ℃体温下扩增20 min左右，即可获取检测结果。方法简单、准确、快速、灵敏，为现制直饮品中铜绿假单胞菌的快速检测提供了新的技术手段。

关键词：铜绿假单胞菌; 酶促等温扩增; 现制直饮品; 快速检测

基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFF1100900)；国家市场监督管理总局技术保障专项(2023YJ17)