RPA偶联微流控技术同步快速检测大肠杆菌及其intI1、sul1与aadA5基因

来源：中国食品学报杂志2025年第6期北京时间：

作者：冉梅娟，董羽织，方结红，冯小芮，吕晨泽，蒋晗

单位：冉梅娟中国计量大学生命科学学院 浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 杭州 310018,董羽织中国计量大学生命科学学院 浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 杭州 310018,方结红中国计量大学生命科学学院 浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 杭州 310018,冯小芮中国计量大学生命科学学院 浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 杭州 310018,吕晨泽中国计量大学生命科学学院 浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 杭州 310018,蒋晗中国计量大学生命科学学院 浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 杭州 310018,

摘要：通过重组酶聚合酶等温扩增技术 (RPA) 结合微流控技术，建立大肠杆菌特异性基因uidA、I型整合子整合酶基因intI1以及耐药基因sul1和aadA5的同步快速检测方法。根据上述基因的保守序列分别设计RPA引物及exo荧光探针，建立RPA偶联微流控方法的反应体系，利用微流控芯片检测设备在39 ℃实时监控反应进程，进行特异性、灵敏度试验和实际样品检测，结果30 min即可完成检测全过程(含10 min煮沸法制备模板DNA时间)。所建立的RPA偶联微流控方法特异性好、灵敏度高，对uidA基因标准质粒的检出限为1.71×102 copies/μL，对intI1基因标准质粒的检出限为9.82×101 copies/μL，对sul1基因标准质粒的检出限为1.18×102 copies/μL，对aadA5基因标准质粒的检出限为2.82×102 copies/μL。在实际样品检测中，RPA 偶联微流控方法与选择培养法、生化鉴定法或PCR方法检出结果完全一致，且RPA偶联微流控方法更快速。本研究建立的可同步快速检测大肠杆菌及 intI1、sul1与aadA5基因的RPA偶联微流控方法，特异性强，灵敏性高，反应时间短，操作方便，可为食源性耐药菌的监测和防控提供方法支持。

关键词：重组酶聚合酶等温扩增技术; 微流控芯片; 食源性致病菌; 耐药基因; 快速检测技术

基金资助：国家重点研发计划项目(2021YFC2600503)；国家自然科学基金项目(32472452，32472292)；浙江省自然科学基金项目(LZ25C200001)