可溶性乳酸菌蛋白酶的克隆表达及酪蛋白源生物活性肽的制备

来源：中国食品学报杂志2026年第1期北京时间：

作者：李博，刘地，燕平梅，武晓英

单位：李博太原理工大学 太原 030024,刘地原师范学院 生物科学与技术学院 山西晋中 030619,燕平梅原师范学院 生物科学与技术学院 山西晋中 030619,武晓英原师范学院 生物科学与技术学院 山西晋中 030619,

摘要：目的:通过可溶性乳酸菌蛋白酶高效制备牛乳蛋白生物活性肽。方法:筛选具备高蛋白水解活性的优势乳酸菌，通过PCR技术扩增其蛋白酶基因的Pre-H结构域，去除编码细胞壁连接区域的序列，使其转化为可溶性蛋白。构建食品级乳酸乳球菌NZ9000表达载体，诱导目的蛋白酶的分泌表达，并分析其酶学特性及酪蛋白水解产物的生物活性。结果:筛选获得的优势乳酸菌菌株被鉴定为德氏乳杆菌乳酸亚种，其蛋白酶基因经改造后得到prtB3基因，成功构建重组表达载体pNZ8048-prtB3，实现了蛋白酶PrtB3在乳酸乳球菌NZ9000中的高效分泌表达。与野生型蛋白酶相比，重组蛋白酶PrtB3的底物特异性显著拓宽，可有效降解α-、β-和κ-酪蛋白；PrtB3水解物对血管紧张素转化酶(ACE)抑制率最高可达78%，为野生型水解产物的2倍，半抑制浓度(IC50)为1.69 mg/mL，且ACE抑制活性在8周内保持稳定；同时，水解产物对金黄色葡萄球菌ATCC 25923和大肠杆菌K14 IBC 4004的生长有明显的抑制作用。结论:成功克隆、表达了可溶性的乳酸菌蛋白酶PrtB3，该酶可高效降解酪蛋白并显著提升水解产物的生物活性与稳定性，在降解酪蛋白制备生物活性肽方面具有潜力，为生物活性肽的高效制备提供了新的技术路径。

关键词：生物活性肽; 酪蛋白; 乳酸菌; 可溶性蛋白酶; 血管紧张素转化酶抑制肽; 抑菌肽

基金资助：山西省基础研究计划(自由探索类)项目