食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种的快速检测

来源：中国食品学报杂志2026年第2期北京时间：

作者：梁美丹，肖剑，陈楷，雷燕，曹霞飞，孙雪奇，周伟杰，白卫滨

单位：梁美丹广州市食品检验所 广州 511405,肖剑广州市食品检验所 广州 511405,陈楷广州市食品检验所 广州 511405,雷燕广州市食品检验所 广州 511405,曹霞飞广州市食品检验所 广州 511405,孙雪奇广州市食品检验所 广州 511405,周伟杰暨南大学生命科学技术学院 广州 510632,白卫滨暨南大学生命科学技术学院 广州 510632,xjhq521@163.com,baiweibin@163.com

摘要：为了建立食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种的分子定量快速检测方法，采用微滴式数字PCR(ddPCR)技术，通过序列比对分析，选择唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种的靶标基因bonM，自主设计和筛选引物探针，并优化反应体系的退火温度。通过标准菌株和人工污染样品验证该方法的特异性、定量线性范围、稳定性和准确性。结果显示，引物探针扩增效率E=96.2%，R2=0.996，优化确认ddPCR反应最佳退火温度为53~55 ℃，建立的ddPCR方法能实现唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种的特异性检测。该方法靶标基因bonM的拷贝数在1.6~5 483.33内呈线性关系(R2=0.999)。在1.6 pg/μL DNA质量浓度重复性试验中，方法检测定量限为1.78 copies/μL，相对标准偏差(RSD)为16.29%，满足精密度和稳定性要求。通过人工污染样品检测验证方法准确度，唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种基因拷贝数换算得到的菌落数(CFU)与实际添加量相对误差在0.53%~16.93%范围，能够实现准确定量检测。本研究建立的ddPCR方法可快速、准确检测食品中的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种，为食品安全监管提供了一种分子精准定量检测技术。

关键词：微滴式数字PCR; 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种; 食品安全; 定量检测

基金资助：广州市科技计划重点研发项目(202206010095)；广东省市场监督管理局科技项目(2023CS02)