基于ISSR、SCAR及荧光定量PCR技术鉴别菊花脑和野菊

来源：中国食品学报杂志2026年第4期北京时间：

作者：王孟虎，徐义菁，张蕴蕴，孟祥松，张文海，左亚锋，王新阳，徐秀泉，刘文苹，栗进才，俞浩，孙一帆

单位：王孟虎亳州学院 安徽亳州 236800;中药原料产品研发安徽普通高校重点实验室 安徽亳州 236800,徐义菁亳州学院 安徽亳州 236800,张蕴蕴亳州学院 安徽亳州 236800,孟祥松亳州学院 安徽亳州 236800;中药原料产品研发安徽普通高校重点实验室 安徽亳州 236800,王新阳亳州学院 安徽亳州 236800,徐秀泉亳州学院 安徽亳州 236800,刘文苹亳州学院 安徽亳州 236800,栗进才亳州学院 安徽亳州 236800,俞浩亳州学院 安徽亳州 236800,孙一帆亳州职业技术学院 安徽亳州 236800,

摘要：目的:利用ISSR、SCAR分子标记技术设计菊花脑特异性引物，采用普通PCR及SYBR荧光定量PCR对菊花脑、野菊进行快速鉴别。方法:查阅文献确定48条ISSR引物，基于ISSR引物对菊花脑、野菊的DNA进行PCR扩增电泳，确定1条ISSR引物能够鉴别菊花脑、野菊，并对退火温度、引物量、模板量、循环次数进行研究。对菊花脑特征条带进行胶回收、单克隆和测序，根据测序结果设计菊花脑特异性引物。利用普通PCR及SYBR荧光定量PCR分别对引物特异性进行验证及检测限考察，并分别对市售菊花脑、野菊花样品进行鉴定。结果:ISSR-35引物可以准确鉴别菊花脑、野菊，菊花脑在500 bp左右有特征条带，最佳退火温度、引物量、模板量、循环次数分别为57 ℃，1 μL，0.5 μL，35次。基于菊花脑特征条带的碱基序列设计菊花脑特异性引物，当退火温度为65 ℃时，菊花脑电泳条带约在250 bp处有单一条带，野菊无条带，且重现性良好。SYBR荧光定量PCR结果显示，菊花脑样品出现有效扩增曲线，并在熔解曲线中形成单一特异性峰，Tm值为77 ℃；野菊样品未出现有效扩增曲线，且未检出特异性熔解峰。利用特异性引物对市售野菊花进行检测，结果显示野菊花中存在2批次菊花脑。结论:根据ISSR、SCAR分子标记获得的特征条带测序碱基序列设计的特异性引物，能够准确、快速鉴别菊花脑和野菊。

关键词：野菊; 菊花脑; ISSR; SCAR; 特异性引物; SYBR荧光定量PCR; 鉴别

基金资助：安徽省高校优秀拔尖人才培育资助项目(YQYB 2024085，YQYB2023064)；安徽省中医药传承创新科研项目(2025CCCX078，2025CCCX207)；安徽省教育厅科学研究项目(2025AHGXZK20162，2025AHGXZK31301)