EML4-ALK融合基因变体1和变体3质控品的建立

来源：药物分析杂志2015年第3期北京时间：

作者：曲守方1, 于婷1, 郭李平2, 赵金银2, 高尚先1, 黄杰1

单位：1. 中国食品药品检定研究院, 北京 100050;2. 中国科学院北京基因组研究所, 北京 100101

摘要：目的: 建立EML4-ALK融合基因质控品,用于评价人类EML4-ALK融合基因突变检测试剂盒的性能. 方法: 根据人类EML4-ALK融合基因序列,合成EML4-ALK融合基因变体1(V1)和变体3(V3)的基因序列.采用限制性内切酶KpnⅠ和Hind Ⅲ 对带有目的基因的质粒和表达载体分别进行酶切,将目的基因与载体连接,转化DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落进行测序.将测序结果正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液,并用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测. 结果: 对人类EML4-ALK融合基因V1和V3质控品进行序列测定和荧光定量RT-PCR检测,结果表明成功建立了人类EML4-ALK融合基因V1和V3假病毒质控品. 结论: 本研究建立了人类EML4-ALK融合基因变体假病毒质控品的方法.可为药物靶向治疗基因检测试剂质量控制提供参考.

关键词：靶向药物;分子靶向治疗;棘皮动物微管相关蛋白样4(EML4);融合基因变体;RNA检测;RT-PCR法;基因检测试剂;质控品建立;标准物质研究,