高危型人乳头瘤病毒E6/E7质控品的建立

来源：药物分析杂志2015年第4期北京时间：

作者：黄杰1, 于婷1, 赵金银2, 郭李平2, 高尚先1, 曲守方1

单位：1. 中国食品药品检定研究院, 北京 100050;2. 中国科学院北京基因组研究所, 北京 100101

摘要：目的: 建立高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7质控品,用于评价高危型HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒的性能。方法: 根据高危型HPV 16和HPV 18的E6/E7基因序列设计引物,从感染HPV 16和HPV 18宫颈上皮细胞中提取DNA作为模板,通过PCR扩增获得带有目的基因的产物。采用限制性内切酶对带有目的基因的PCR产物和表达载体分别进行酶切,将目的基因与表达载体连接,然后转化DH5α感受态细胞,筛选出阳性菌落进行测序。然后将阳性菌液进行超声诱导,制备假病毒溶液。采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行鉴定。结果: 通过序列测定和荧光定量RT-PCR法检测,结果表明成功建立了高危型HPV E6/E7假病毒质控品。结论: 本研究建立了HPV E6/E7质控品的方法,可为高危型HPV E6/E7 mRNA检测试剂的质量控制提供质控品。

关键词：人乳头瘤病毒;高危型;早期基因;信使核糖核酸;质控品;mRNA检测;DNA检测;荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,