铁皮石斛的ITS2条形码分子鉴定及5种重金属及有害元素的测定

来源：药物分析杂志2015年第6期北京时间：

作者：严华1,2, 石任兵1, 姚辉3, 张文娟2, 李明华2, 程显隆2, 余坤子2, 魏锋2, 马双成2

单位：1. 北京中医药大学, 北京100102;2. 中国食品药品检定研究院, 北京100050;3. 中国医学科学院北京协和医学院, 药用植物研究所濒危药材繁育国家工程实验室, 北京100193

摘要：目的: 应用DNA条形码技术,从分子水平快速、准确地鉴定我国12个省区铁皮石斛栽培基地铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)及其同属常见植物的基原,采用微波消解ICP-MS技术测定各地铁皮石斛中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)5种重金属及有害元素的含量,评价栽培铁皮石斛的用药安全。方法: 提取各样本总DNA,对rDNA的第二内转录间隔区(ITS2区)进行扩增,计算种内、种间Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离,通过与中药材DNA条形码鉴定系统比对和构建N-J(Neighbor-Joining)系统树进行基原鉴定。建立微波消解方法进行样品前处理,ICP-MS法对铁皮石斛中5种重金属及有害元素进行测定,比对国内外现行标准,对铁皮石斛的安全性进行评价。结果: 铁皮石斛的ITS2序列长度在246~340 bp范围,种内变异较小,种内最大K2P遗传距离为0.009,铁皮石斛及其混伪品的种间平均K2P遗传距离为0.206,种间最小K2P遗传距离明显大于种内的最大K2P遗传距离。经与中药材DNA条形码鉴定系统比对及构建N-J树进行基原鉴定。结果表明ITS2序列可区分铁皮石斛及其近缘种。5种重金属及有害元素的测定结果表明各地的含量差异较显著,但在安全的范围内。结论: ITS2片段DNA条形码可有效鉴定中药铁皮石斛及其常见同属植物的基原,建立的ICP-MS法测定铁皮石斛中5种重金属与有害元素的方法准确、可行,各元素的含量在现行相关标准的安全范围内。

关键词：铁皮石斛;第二内转录间隔区(ITS2);DNA分子鉴定;基原鉴定;微波消解;电感耦合等离子体质谱;重金属;有害元素,