贝伐珠单克隆抗体的HPLC定量检测方法的建立

来源：药物分析杂志2015年第6期北京时间：

作者：邹有土, 郑和东, 阮卡, 马燕玲, 陈星

单位：未名生物医药有限公司, 厦门361009

摘要：目的: 建立HPLC-Protein A定量检测贝伐珠单抗的方法,用于该单抗生产过程的含量测定和质量控制。方法: 采用Agilent Bio-Monolith Protein A Column(5.2 mm×4.95 mm,0.10 mL)色谱柱,以PBS(含0.12 mol·L-1氯化钠,pH 7.4)为流动相A,0.5 mol·L-1 醋酸(pH 2.5)为流动相B。上样后用流动相A冲平,然后用流动相B进行洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为25 ℃,检测波长为280 nm。结果: 以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,在0.078~10.0 mg·mL-1浓度范围内,R2>0.999;回收率在98.32%~101.7%之间;批内精密度RSD≤1.5%;批间精密度RSD≤1.6%;检测限0.30 μg,定量限0.90 μg;在pH变化±0.2、流动相A中氯化钠浓度变化±10.0%、柱温变化±5.0 ℃、流速变化±20.0%条件下,峰面积相对标准差RSD为0.39%~1.0%;发酵液样品的保留时间为1.350 min,与对照品的保留时间一致;在18 h内,同一批发酵液共检测27次,峰面积的RSD为0.44%。结论: 方法学验证结果显示HPLC-Protein A法可以用于贝伐珠单抗生产过程的含量测定和质量控制。

关键词：贝伐珠单抗;单克隆抗体质量控制;Protein A色谱柱;金黄色葡萄球菌A蛋白;快速定量检测;高效液相色谱法;方法学验证,