SPE-LC-MS/MS法测定人外周血单核细胞内齐多夫定三磷酸化物

来源：药物分析杂志2015年第8期北京时间：

作者：牟玲丽1, 李三望2, 刘星菱2, 谢非凡1,2, 周瑞2, 唐芳2, 余鹏2

单位：1. 湖南师范大学医学院, 长沙410006;2. 中南大学药学院, 长沙410013

摘要：目的: 建立人外周血单核细胞(hPBMCs)内齐多夫定三磷酸化物(ZDV-TP)的固相萃取-液相色谱-串联质谱(SPE-LC-MS/MS)测定方法,并将其应用于临床试验中ZDV-TP在hPBMCs内浓度的测定。方法: hPBMCs样本采用强阴离子交换固相萃取小柱实现ZDV-TP与齐多夫定(ZDV)、齐多夫定一磷酸化物(ZDV-MP)和齐多夫定二磷酸化物(ZDV-DP)的分离后,加入酸性磷酸酶将其去磷酸化为等物质的量的齐多夫定原药。去磷酸化后的样本经HLB固相萃取小柱脱盐处理后,采用Agilent XDB-C18色谱柱,以0.2%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行等度洗脱。采用ESI正离子模式检测,离子监测方式为MRM,用于定量分析的离子反应分别为m/z 267.9→m/z 126.8(ZDV)和m/z 247.9→m/z 120.8(替硝唑,内标)。结果: ZDV-TP在0.112 5~82.05 ng·mL-1(每106个细胞含ZDV-TP 0.06~43 pmol),范围内线性良好(r=0.997 1),定量下限为0.112 5 ng·mL-1。日内及日间精密度(RSD)均小于9.0%,回收率和基质效应均符合生物样本的测定要求。结论: 本文所建立的方法灵敏度高,专属性强,且成功应用于临床试验中ZDV在hPBMCs内的ZDV-TP的测定。

关键词：固相萃取-液相色谱-串联质谱法(SPE-LC-MS/MS)齐多夫定;齐多夫定三磷酸化物;人外周血单核细胞(hPBMCs);生物样本检测,