冬虫夏草与5种人工发酵菌丝体的DNA分子鉴别方法

来源：药物分析杂志2015年第8期北京时间：

作者：张文娟, 王晓, 张萍, 魏锋, 马双成

单位：中国食品药品检定研究院, 北京100050

摘要：目的: 建立冬虫夏草与人工发酵菌丝体的鉴别方法。方法: 通过聚合酶链式反应(PCR),扩增基因组上的核糖体基因内转录间隔区(ITS),继而用限制性内切酶XhoⅠ对该聚合酶链式反应产物进行酶切,将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像;通过聚合酶链式反应扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)的编码基因,将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳及紫外成像。结果: 冬虫夏草ITS的PCR产物能够被XhoⅠ酶切成2个片段。而5种人工发酵菌丝体中,有4种不能够被酶切;由于来源于冬虫夏草无性型中华被毛孢,百令胶囊可被酶切且切割条带大小与冬虫夏草组一致。冬虫夏草样品全部扩增得到COⅠ基因(CO Ⅰ)片段,而5种人工发酵菌丝体均未扩增出该片段。结论: 结合聚合酶链式反应限制性内切酶片段长度多态性法以及CO Ⅰ 聚合酶链式反应扩增,可以鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体。

关键词：冬虫夏草;DNA鉴别;聚合酶链式反应(PCR);内转录间隔区(ITS);细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因,