CYP2C19基因多态性检测方法的建立

来源：药物分析杂志2015年第9期北京时间：

作者：黄杰1, 于婷1, 张喆2, 蔡从利2, 高尚先1, 曲守方1

单位：1. 中国食品药品检定研究院, 北京 100050;2. 武汉友芝友医疗科技有限公司, 武汉 430075

摘要：目的: 建立检测CYP2C19基因多态性的PCR-荧光探针法,为预测CYP2C19代谢药物的疗效提供新的检测试剂盒。方法: 应用Primer Express 3.0软件针对人类CYP2C19基因CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17多态性位点设计引物和探针。以经测序确认为杂合突变型、纯合突变型或野生型的人类全血基因组DNA(genomic DNA, gDNA)样本为模板,应用荧光PCR法筛选合适的引物和探针,建立和优化CYP2C19基因多态性检测荧光PCR法。然后用特定浓度且基因型已知的人类全血gDNA样本作为质控品评价该方法的准确性、灵敏度和特异性。最后用100例临床样本验证该方法的临床适用性,并与直接测序结果进行比较,计算Kappa值。结果: 建立的CYP2C19基因多态性检测PCR-荧光探针法,能准确地检测出CYP2C19*2、*3和*17多态性位点杂合突变型和纯合突变型;灵敏度为每个反应体系约1 ng;以基因型已知为野生型的全血gDNA为模板进行检测的结果显示均为野生型。临床样本的检测结果显示与测序结果的一致性较好,Kappa值为1.00。结论: 建立的CYP2C19基因多态性检测方法具有很好的准确性、灵敏度和特异性,且具有很好的临床适用性,可以用于CYP2C19代谢的药物疗效的预测。

关键词：基因多态性检测;细胞色素P450;S-美芬妥英-4-羟化酶;CYP2C19酶;荧光聚合酶链式反应;PCR-荧光探针法;药物疗效检测,