甲型流感病毒NP含量ELISA检测方法的建立

来源：药物分析杂志2015年第9期北京时间：

作者：权娅茹, 崔晓雨, 邵铭, 刘书珍, 易敏, 李长贵, 王军志, 袁力勇

单位：中国食品药品检定研究院, 北京 100050

摘要：目的: 建立一种双抗体夹心ELISA检测方法,以检测流感疫苗中甲型流感病毒的核蛋白(NP)含量。方法: 体外重组表达NP作为ELISA法测定蛋白含量参考品,筛选捕获抗体和检测抗体工作浓度、起始浓度和系列稀释倍数,建立ELISA法并对其进行优化和验证。结果: 获得的重组NP纯度为99.0%以上。建立和优化后的ELISA参数:捕获抗体4 μg·mL-1,检测抗体1:1 000。NP含量参考品起始浓度为300~600 ng·mL-1,四参数拟合S型曲线的决定系数R2大于0.95,对疫苗中的甲型流感病毒NP具有特异性,原液和成品的加标回收率为88.2%~95.3%,方法重复性(n=5)的RSD小于15%。结论: 建立的流感疫苗中甲型流感病毒NP含量ELISA检测方法特异性好,准确性和精密性高,可用于疫苗样品中甲型流感病毒NP含量的检测。

关键词：甲型流感病毒;核蛋白(NP);重组NP;酶联免疫吸附测定(ELISA);捕获抗体;检测抗体,