基于ITS序列分析鉴别冬虫夏草与古尼虫草

来源：药物分析杂志2015年第9期北京时间：

作者：张文娟, 康帅, 魏锋, 马双成

单位：中国食品药品检定研究院, 北京 100050

摘要：目的: 冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,最易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别。方法: 通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从GenBank下载2种虫草的ITS序列;利用CodonCode Aligner和MEGA软件对ITS序列进行分析,找到2种虫草差异的酶切位点;通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)实验进行验证。结果: 在ITS序列上,冬虫夏草存在1个SacⅡ酶切位点,而古尼虫草不具有该位点。PCR-RFLP的实验结果表明,冬虫夏草ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶SacⅡ切割为2个片段,大小分别约为488 bp和128 bp,古尼虫草不能被SacⅡ切割,所以酶切前后其PCR产物在琼脂糖凝胶图上的位置没有变化。从子实体取样和从虫体取样得到一致的结果 。结论: PCR-RFLP法可以将冬虫夏草与古尼虫草明确区分,取样部位不同对本方法的结果没有影响。

关键词：冬虫夏草;古尼虫草;DNA分子鉴定;聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP);内转录间隔区(ITS),