柱前衍生化HPLC法同时测定龟甲胶中14种水解氨基酸含量

来源：药物分析杂志2015年第10期北京时间：

作者：江东龙, 陈芳, 熊丹丹, 卢建中

单位：江中药业股份有限公司, 南昌 330096

摘要：目的: 建立一种利用HPLC法同时测定龟甲胶中14种氨基酸的含量。方法: 样品以6 mol·L-1盐酸于110 ℃水解7 h,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺活化环氨基甲酸酯(AQC)进行衍生化反应,采用Kromasil C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm),柱温37 ℃,以0.14 mol·L-1三水合乙酸钠(pH 4.85)为流动相A,60%乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速1.4 mL·min-1,检测波长248 nm。结果: 在一定的浓度范围内,各种氨基酸峰面积和浓度呈良好的线性关系,r值均大于0.999 0;加样回收率(n=9)为94.5%~103.6%;不同样品中14种氨基酸含量范围分别为羟脯氨酸7.08%~8.22%、谷氨酸5.94%~8.21%、丝氨酸2.48%~3.12%、组氨酸0.25%~0.44%、甘氨酸14.35%~16.86%、精氨酸4.78%~5.76%、苏氨酸1.24%~1.75%、丙氨酸4.65%~6.56%、脯氨酸6.78%~8.83%、酪氨酸0.55%~0.84%、缬氨酸0.95%~1.40%、异亮氨酸0.70%~0.95%、亮氨酸1.59%~2.06%、苯丙氨酸1.35%~1.57%。结论: 该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于龟甲胶中羟脯氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸的检测。

关键词：龟甲胶;柱前衍生化;水解氨基酸;6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺活化环氨基甲酸酯;衍生化试剂;高效液相色谱,