ELISA抑制法检测动物组织中α1,3-Gal抗原

来源：药物分析杂志2015年第10期北京时间：

作者：陆艳1,2, 单永强1,2, 邵安良2, 曾碧新1, 徐丽明1,2

单位：1. 温州医科大学检验医学院 生命科学院, 温州 325035;2. 中国食品药品检定研究院, 北京 100050

摘要：目的: 用人工合成的Gal/BSA抗原对骨髓瘤细胞的Gal抗原表位数进行赋值;再用骨髓瘤细胞作为参照品,建立并优化单克隆特异性抗体M86检测动物组织中α1,3-Gal(Gal)抗原的ELISA抑制法。应用优化后的方法,检测猪和小鼠组织Gal抗原表位数。方法: 将待测物抗原(Gal-BSA系列稀释液、SP2/0细胞及待检组织样品)与M86特异性抗体反应后离心,取含有M86剩余抗体的上清液;再与Gal-BSA包被的固相抗原反应,计算出待测样品和标准曲线样品的M86结合抑制率;之后绘制相应的质量浓度-结合抑制率曲线,再根据曲线拟合公式计算其50%结合抑制时的质量浓度;进而计算Gal抗原表位数。结果: 各结合抑制曲线相关性较好,R2> 0.95。SP2/0骨髓瘤细胞Gal抗原数为每个细胞6.19×108个;利用优化了的方法检测猪的冻干组织抗原含量趋势为:肺> 肾> 脾> 心> 腹膜> 心包膜> 肝组织> 皮肤;小鼠的新鲜湿组织抗原含量趋势为:心> 肺> 脾> 肾> 肝。结论: 应用骨髓瘤细胞作为参照品,所建立的M86抗体ELISA抑制法检测动物组织的Gal抗原含量具有较好的敏感性和特异性,为进一步建立该方法规范性的行业标准奠定了基础。

关键词：动物源性生物材料;免疫排斥反应靶抗原检测;Gal抗原;M86特异性抗体;ELISA 抑制法,