HPLC-MS/MS法同时测定小鼠生物样品中葛根素和梓醇的浓度

来源：药物分析杂志2016年第9期北京时间：

作者：汤丹丹1, 张焦1, 王帆1, 张继芬1, 徐晓玉1,2

单位：1. 西南大学药学院, 重庆 400716;2. 重庆市药效评价工程技术中心, 重庆 400716

摘要：目的：建立同时检测小鼠血浆、脑匀浆中葛根素和梓醇浓度的HPLC-MS/MS法，为梓葛制剂的药动学研究提供检测方法。方法：分别以对羟基苯甲醛和桃叶珊瑚苷为葛根素、梓醇的内标物，血浆或脑匀浆沉淀蛋白后，采用HPLC-MS/MS法同时检测各物质。色谱条件：采用Eclipse plus C18（100 mm×4.6 mm，3.5 μm）色谱柱，以甲醇-10 mmol·L-1乙酸胺（含0.1%甲酸）（80：20）为流动相，流速0.6 mL·min-1，柱温30 ℃；质谱条件：电喷雾离子化源，多重反应监测，葛根素和对羟基苯甲醛采用负离子方式（选择监测离子反应分别为m/z 415.0→295.0和m/z 120.9→91.8），梓醇和桃叶珊瑚苷采用正离子方式（选择监测离子反应分别为m/z380.4→183.0和m/z 364.2→167.0）。按中国药典规定进行相应的方法学考察。结果：血浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.056 3~11.3 μg·mL-1（r=0.993 6）、0.398~25.5 μg·mL-1（r=0.995 9），定量下限（LLOQ）分别为0.056 3 μg·mL-1、0.039 8 μg·mL-1；脑匀浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.028 2~2.25 μg·mL-1（r=0.996 4）、0.019 9~2.25 μg·mL-1（r=0.998 5），LLOQ分别为0.028 2 μg·mL-1、0.019 9 μg·mL-1。葛根素和梓醇日内、日间精密度均小于15%，准确度为81.7%~110.0%，相对提取回收率为81.3%~105.0%，基质效应的RSD均小于15%。小鼠灌胃梓葛纳米晶混悬液后，小鼠血浆中葛根素和梓醇的t1/2分别为（2.14±1.13）h和（1.70±0.41）h，脑匀浆中的t1/2分别为（4.30±1.63）h和（3.88±1.09）h；血浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为（7.40±3.05）mg·L-1·h-1和（32.13±5.29）mg·L-1·h-1，脑匀浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为（1.29±0.42）mg·L-1·h-1和（0.54±0.16）mg·L-1·h-1。结论：该法专属性强，灵敏、准确、快捷，适用于梓葛配伍制剂的药动学研究。

关键词：葛根素;梓醇;黄酮类化合物;环烯醚萜类化合物;野葛;地黄;梓葛配伍;血药浓度;脑药浓度;高效液相色谱-质谱联用,