野艾蒿中4种黄酮类化合物对HepG2细胞AMPK和LPIN1表达的影响

来源：药物分析杂志2017年第1期北京时间：

作者：文荣, 周成江, 贾彦彬, 仲涛

单位：1. 包头医学院, 包头 014060;2. 乌海市第三人民医院, 乌海 016000

摘要：目的：研究野艾蒿（Artemisia lavandulaefolia DC.）中木犀草素、柚皮素、槲皮素、芹菜素4种黄酮类单体化合物对HepG2细胞的腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和磷脂酸磷酸水解酶1（LPIN1）表达的影响，从分子水平探明其降血脂的有效成分。方法：以HepG2细胞为研究对象，用细胞毒性实验（MTT法）观察野艾蒿中4种单体黄酮类化合物在不同用药时间和浓度时对HepG2细胞增殖的影响，并从中筛选出合适的用药浓度和作用时间。将实验分为对照组和药物组，根据筛选出的用药时间和浓度对培养细胞进行药物干预，分别抽提对照组和实验组细胞总RNA与总蛋白，实时荧光定量PCR检测LPIN1、AMPKα1和AMPKα2 mRNA表达情况，蛋白质印迹法（Western blot法）检测LPIN1、AMPKα1、AMPKα2和p-AMPK蛋白表达情况。结果：（1）4种黄酮类单体化合物均可不同程度抑制HepG2细胞的增殖，并在用药质量浓度0.01 mg&amp;#183;mL-1，作用时间24 h（药物对细胞的抑制率在15%~25%）为最适合作用条件。（2）实时荧光定量PCR检测结果显示，药物组AMPKα1mRNA表达与对照组比较无显著差异（P&gt;0.05）；药物组AMPKα2 mRNA表达与对照组比较，柚皮素、槲皮素有统计学意义（P&lt;0.05），且表达水平升高；LPIN1 mRNA表达中，药物组与对照组比较均有显著性差异（P&lt;0.01），且表达量均显著降低。（3）Western blot结果显示，药物组AMPKα1蛋白表达与对照组比较，均无显著性差异（P&gt;0.05）；AMPKα2蛋白表达中，药物组均有显著性差异（P&lt;0.05），且表达量升高；lpin1蛋白表达中，药物组与对照组比较均有显著性差异（P&lt;0.01），且表达量均降低；p-AMPK蛋白表达均有显著性差异（P&lt;0.01），且表达水平升高，提示野艾蒿乙酸乙酯提取的黄酮类化合物可通过磷酸化使ampk活化。结论：（1）野艾蒿乙酸乙酯提取的4种黄酮类单体化合物可不同程度抑制HepG2细胞的增殖。（2）4种黄酮类单体化合物对HepG2细胞AMPKα1基因和蛋白表达均无明显作用；柚皮素和槲皮素可提高HepG2细胞内AMPKα2基因表达水平；4种黄酮类单体化合物均使AMPKα2蛋白表达量升高。同时均可显著降低HepG2细胞内LPIN1基因和蛋白表达水平；4种黄酮类单体化合物均可增加p-AMPK蛋白表达，提示均可激活AMPK磷酸化，使其活化。<!--0.01），且表达水平升高，提示野艾蒿乙酸乙酯提取的黄酮类化合物可通过磷酸化使ampk活化。<b--><!--0.01），且表达量均降低；<i--><!--0.05），且表达量升高；lpin1蛋白表达中，药物组与对照组比较均有显著性差异（<i-->

关键词：Artemisia lavandulaefolia; luteolin; naringenin; quercetin; apigenin; AMPK; LPIN1; activity analysis; cytotoxicity analysis; MTT method; real time-PCR,