软琼脂克隆形成实验评价药物体外抑瘤性与成瘤性

来源：药物分析杂志2017年第3期北京时间：

作者：齐乃松, 郭建, 王雪, 文海若

单位：1. 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176;2. 河南省食品药品检验所, 郑州 450003;3. 首都医科大学附属北京同仁医院急诊科, 北京 100730

摘要：目的：分别采用肿瘤细胞系和转化细胞系摸索软琼脂克隆形成实验的适宜条件，并对冬凌草甲素（oridonin，ORI）的抑瘤性和没食子酸乙酯（ethyl gallate，EG）促瘤性进行评价。方法：1）摸索实验条件：采用6 孔板固态培养法，按不同密度（每孔500~20 000 个）将肿瘤细胞系（Hela，K562 和HepG2）和转化细胞系（Bhas 42）与软琼脂混合铺板，计数克隆形成率。2）HepG2 细胞分别与质量浓度为0.016、0.08、0.4、2、10、50 μg&amp;#183;mL-1 的ORI 溶液混合后铺板；Bhas 42 细胞预先经质量浓度为0.3、1、3 μg&amp;#183;mL-1 的EG 溶液处理后，镜下观察细胞达到转化状态后，与软琼脂混合铺板培养。经培养后观察给药处理对克隆形成率的影响。3）利用流式细胞仪分析ORI 和EG 对细胞周期的影响。结果：细胞接种密度为每孔1 000 个左右时，利用肿瘤细胞和转化细胞开展软琼脂克隆形成实验效果较好。ORI 作为抑瘤药物在低浓度条件可显著降低HepG2 细胞的克隆形成率（P&lt;0.01），且对细胞增殖有抑制作用。EG 随给药浓度增加可显著升高Bhas42 的克隆形成率（P&lt;0.01），但对细胞增殖影响不显著。结论：软琼脂克隆形成实验以克隆形成率为检测指标，可较为简便而灵敏地检测药物引起的抑瘤性和促瘤性。该实验结果与细胞周期分析结果相互印证。两者的有机结合，可用于药物对细胞增殖及成瘤性的影响的初步分析。<!--0.01），但对细胞增殖影响不显著。<b-->

关键词：soft agar colony formation assay; test conditions; tumor cell lines; transformed cell lines; tumorigenicity; tumor suppression effect; oridonin; ethyl gallate,