定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质病毒突变的荧光MAPREC法的建立和应用

来源：药物分析杂志2018年第2期北京时间：

作者：徐康维, 张平, 英志芳, 何蕊, 王剑锋, 江征, 李长贵

单位：1. 中国食品药品检定研究院, 北京 100050;2. 北京天坛生物制品有限公司, 北京 100176

摘要：目的：使用荧光标记代替同位素标记，建立定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒472位U到C突变比例的MAPREC（mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage）法。方法：提取病毒样品RNA，反转录合成cDNA后进行非对称PCR反应以生成单链DNA扩增产物，之后采用荧光标记引物进行扩增，合成双链产物，以突变位点敏感的限制性内切酶作用后电泳分离，并分析样品的突变比例。结果：采用建立的方法对4个国际标准品进行检测，100% DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100%、0.9%、0.7%、1.1%，检测结果分别为95.59%、0.84%、0.68%、1.07%，与其标示值一致性良好，并且不同实验间RSD均小于15%。检测9个批次样品，结果突变率均小于1%，符合WHO要求。结论：初步建立了基于荧光素标记的MAPREC方法，可以代替同位素法进行病毒突变的定量检测。

关键词：MAPREC; poliovirus; vaccine; fluorescent labelling; mutant content,